Exemplo de objetivo

O epigenoma é mais suscetível a alterações induzidas pelo ambiente na fase pré-natal, quando as marcas epigenéticas são restabelecidas após o apagamento após a fertilização [15, 16]. O estudo proposto investigará o impacto da exposição a altas temperaturas nos estágios iniciais e finais do desenvolvimento embrionário na sobrevivência das ninfas de C. scorpioides, no tempo de desenvolvimento e nas características morfológicas e reprodutivas dos adultos. Os ncRNAs serão extraídos dos tecidos testiculares e ovarianos de indivíduos experimentais e congelados para posterior construção da biblioteca e sequenciamento de RNA. O objetivo deste projeto é aumentar a nossa compreensão da fase da história de vida em que os ectotérmicos tropicais são mais vulneráveis ​​ao aquecimento climático.

Este estudo testará a hipótese de que a exposição a altas temperaturas durante o desenvolvimento embrionário tem impacto negativo neste pseudoescorpião neotropical. Como a reprogramação epigenética ocorre logo após a fertilização, prevê-se que os efeitos prejudiciais do aumento da temperatura serão mais severos em indivíduos que experimentam altas temperaturas como embriões em estágio inicial, em comparação com aqueles que são expostos mais tarde no desenvolvimento embrionário. Prevê-se também que a exposição embrionária precoce cause maior perturbação nos pequenos perfis de expressão de ncRNA do que a exposição tardia.

Variação de temperatura durante o desenvolvimento embrionário. Os acasalamentos serão realizados em três blocos com 27 pares de machos e fêmeas não aparentados por bloco. As fêmeas serão designadas aleatoriamente para um dos três tratamentos diurnos de temperatura flutuante: um tratamento de exposição precoce (E); um tratamento de exposição tardia (L) e um tratamento de controle (C). As fêmeas do tratamento C serão mantidas durante toda a gestação em incubadora programada para temperatura média de 27,3°C, temperatura média atual no habitat natural de C. scorpioides. No tratamento E, as fêmeas serão transferidas para uma incubadora idêntica programada para uma temperatura média de 29,3°C (+ 2°C) durante os dias embrionários 1 - 5 (E1 - 5) e depois devolvidas à incubadora controle. As fêmeas L serão mantidas na temperatura de controle até E5 e depois trocadas para a incubadora de temperatura mais alta para E6 - 10. No dia 5 do desenvolvimento embrionário, os sacos de cria de todas as fêmeas grávidas serão fotografados em grande ampliação, e o número de embriões contados. O estado reprodutivo das fêmeas será monitorado, os casos de aborto espontâneo serão registrados e o número de protoninfas (ninfas de primeiro estágio) nascidas de fêmeas que levam ninhadas com sucesso até o termo será contado para documentar a sobrevivência.

Criando ninfas até a idade adulta. Um subconjunto de 20 protoninfas de cada fêmea será criado até a fase adulta em frascos individuais na temperatura controle. O tempo de desenvolvimento desde o nascimento até a idade adulta será registrado e, para os frascos que não produzirem um adulto dentro de 60 dias após o nascimento, a ninfa será pontuada como não tendo sobrevivido.

Traços adultos. Para avaliar os efeitos da temperatura nas características morfológicas, descendentes adultos masculinos e femininos dos tratamentos E, L e C serão fotografados em grande ampliação, e cinco características dos pedipalpos (apêndices utilizados na captura de presas e combate de machos) e cefalotórax serão medidas. Para determinar os efeitos nas características reprodutivas, os descendentes masculinos dos três tratamentos serão acasalados com fêmeas não experimentais e pacotes de espermatozoides serão coletados para quantificar o número e a viabilidade dos espermatozoides. A prole feminina de cada tratamento será acasalada com machos não experimentais. O número de embriões em estágio inicial que as fêmeas produzem fornecerá uma medida de sua fertilidade, e seu sucesso reprodutivo será quantificado pela contagem do número de ninfas nascidas.